CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA

Separação de pigmentos de folhas verdes por Cromatografia em Camada Delgada de Sílica Gel (CCD)

Introdução Teórica

A cromatografia é um método físico-químico de separação. Ela está fundamentada na migração diferencial dos componentes de uma mistura, que ocorre devido a diferentes interações, entre duas fases imiscíveis, a fase móvel e a fase estacionária. É uma técnica versátil e de grande aplicação, pois possui uma variedade de combinações entre fases móveis e estacionárias.

(... )separações cromatográficas se devem à adsorção, partição, troca iônica, exclusão ou misturas desses mecanismos.

Objetivo

Entender a preparação do extrato;
Aprender a aplicar a amostra na placa de sílica gel;
Aprender sobre Cromatografia em Camada Delgada (CCD) e seus cálculos de Rf (Fator de Retenção);
Identificar as substâncias no cromatograma.

Material e Reagentes

Procedimento Experimental

Preparação do extrato

Colocar em um almofariz 5-10 folhas de espinafre e alguns mililitros de uma mistura de 2:1 de éter de petróleo (fração de p.e 80-100ºC) ou hexano e etanol. Triturar bem as folhas. Utilizando uma pipeta de Pasteur e uma bolinha de algodão, filtrar o extrato, transferindo-o para um funil de separação. Adicionar o mesmo volume d água. Girar lentamente o funil, pois a agitação brusca pode causar a formação de emulsão (um colóide no qual pequenas partículas de um líquido são dispersas em outro líquido). Separar e descartar a fase aquosa. Repetir esta operação de lavagem por mais duas vezes, sempre descartando a fase aquosa. Transferir a solução de pigmentos para um Erlenmeyer e adicionar aproximadamente 2g de sulfato de sódio anidro. Após alguns minutos, utilizando a pipeta de Pasteur, decantar a solução de pigmentos do sulfato de sódio, transferindo para um béquer. Se a solução não estiver fortemente colorida de verde escuro, concentrar parte do éter de petróleo usando uma suave corrente de ar.

Aplicação da amostra na placa

Utilizando um capilar, foram aplicadas sete porções da solução de pigmentos sobre uma placa de sílica (2,5 x 7,5) a 1,0cm de cada extremidade. Evitar a difusão da mancha de forma que seu diâmetro não deva ultrapassar a 2 mm durante a aplicação da amostra. Deixar o solvente evaporar.

Desenvolvimento do cromatograma

Preparar um cuba colocando uma tira de papel de filtro de 4,0 x 5,0 cm e 5 mL de clorofórmio. Esperar o tempo suficiente para que ocorra a completa saturação. Colocar a placa na cuba, evitando que o ponto de aplicação da amostra mergulhe no solvente. Quando o solvente atingir a outra marca de 1,0 cm no topo da placa, remover a placa e colocar na estufa para secar por aproximadamente 3 minutos. Observar o número de manchar coloridas. Marcar a distância entre o ponto de aplicação do extrato e a frente do solvente, além da distância percorrida por cada substância, iniciando pelo ponto de aplicação até o centro de maior concentração da mancha.

As cores laranja são carotenos, as amarelas são xantofilas e azul esverdeada e verde são clorofila a e b, consecutivamente.

Para calcular o fator de retenção (Rf) mede-se a distância de uma linha à outra para encontrar o valor de X, em seguida, marca-se a distância de cada mancha colorida até a linha inicial e divide-se pelo valor de X. Observe a fórmula: Rf A = a/x ; Rf B = b/x ; Rf C .

Resultado

Após aplicação do extrato na placa de sílica gel e a introdução do material no béquer com SOMENTE clorofórmio, o líquido foi absorvido rapidamente, porém após 20 minutos a absorção ficou cada vez mais lenta e a mancha só pode ser arrastada conforme houve o isolamento da entrada de ar (o béquer foi tampado com papel ofício) e, então, a mancha foi arrastada até a linha superior da placa de sílica gel concluindo a reação e em seguida foi levada à estufa. Após seca, foram marcadas as manchas e a terceira de cima para baixo só foi possível ser localizada através do UV.

Cálculo de Fator de Retenção (Rf) só pode ter sido calculado devido à marcação das cores:
X = 4,8

Conclusão

Em relação ao extrato da folha, não houve muito entendimento de como foi sua preparação, pois o experimento da cromatografia foi feito com o extrato já preparado por outras mãos. Entretanto, a aplicação da amostra (extrato) na placa de sílica gel foi bem sucedida.
Foi observado que somente com a utilização de clorofórmio, sem ter a acetona em participação conjunta, além de fazer com que o processo de dispersão das manchas coloridas se torne mais lento, o resultado só será obtido satisfatoriamente se houver o isolamento de ar com a solução.
É importante a visualização em raios UV para que possamos observar todas as manchas coloridas, inclusive as que não são possíveis enxergar a olho nu e, assim, o cálculo de Rf terá um resultado adequado.

Neste experimento observamos a clorofila b, xantofilas e carotenos, pois só houve o aparecimento das cores verde, laranja e amarela. Ou seja, no extrato de espinafre analisado, não havia a clorofila B ou não pode ser analisado devido ao fato de só o clorofórmio ter sido utilizado.

Bibliografia

COLLINS, C.H.; BRAGA, G.L. e BONATO, P.S. Introdução a métodos cromatográficos. 6ª ed. Campinas: Editora da Unicamp, 1995.
CHAVES, M.H.; Análise de extratos de plantas por CCD: uma metodologia aplicada à disciplina Química Orgância . Química Nova, v. 20, n. 5, p. 560-562, 1997.
ROBERTS, R.M.; GILBERT, J.C.; RODEWALD, L.B.; WINGROVE, A.S., Modern experimental organic chemistry, 4th ed, Philadelphia Saunders College Publishing, 1985.
DEGANI, A.L.G.; CASS, Q.B.; VIEIRA, P.C., Química Nova na Escola, 1998.
Centro Universitário Estadual da Zona Oeste
Separação de pigmentos de folhas verdes por Cromatografia em Camada Delgada de Sílica Gel (CCD)

Fonte: http://georgequimica.blogspot.com.br/2010/09/cromatografia-em-camada-delgada.html

Postado por Renata Barbosa Rodrigues